东北虎 β、γ 和 β-γ 干扰素蛋白的制备及生物学活性研究

东北虎是我国乃至全球稀有动物之一。调查结果显示,我国东北圈养东北虎中有较高比例的体内存在犬瘟热病毒和 H5、H9 亚型禽流感的阳性抗体。保护野生动物对生态环境的平衡维护与改善,保护人与自然之间的和谐关系,乃至经济社会的稳定发展都具有相当深远的意义。干扰素作为一组细胞因子,是抗病毒免疫的第一道防线。本研究成功扩增了东北虎IFN-β(PtIFN-β)和IFN-γ(PtIFNγ),并通过重叠延伸聚合酶链反应(SOE-PCR)将两者融合。生物信息学分析表明,PtIFN-β和PtIFN-γ在进化过程中具有物种特异性和保守性。在原核生物中表达后,分析了PtIFN-β、PtIFN-γ和PtIFNβ-γ的抗病毒活性和理化性质。在猫肾细胞(F81)中,PtIFNβ-γ表现出比PtIFN-β和PtIFN-γ更活跃的抗病毒活性,具有更稳定的理化性质(耐酸碱、耐高温)。此外,PtIFN-β、PtIFN-γ和PtIFN-α激活JAK-STAT通路,并诱导干扰素刺激基因(ISG)的转录和表达。Janus激酶(JAK)1 抑制剂抑制PtIFN-β、PtIFN-γ和PtIFN-α诱导的ISGs表达。总体而言,本研究阐明了PtIFN-β、PtIFN-γ和PtIFNβ-γ具有抑制病毒复制并通过JAK-STAT途径发送信号的能力。这些发现可能有助于进一步研究PtIFN在抗病毒免疫反应中的作用,并有助于开发基于融合干扰素的病毒性疾病预防和治疗方法。