小叶栎体细胞胚胎发生研究

[目的]小叶栎(Quercus chenii)属壳斗科(Fagaceae)栎属(Quercus)落叶高大乔木,其心材为黄红色,为目前发现的红橡木优质硬木乡土珍贵树种,广泛分布于我国南方亚热带地区丘陵山地,作为珍贵用材造林树种开发利用,前景广阔。当前,小叶栎材质优良,但因资源分布比较分散,苗木短缺,因此,研究建立小叶栎体细胞胚胎发生无性快繁技术体系,生产小叶栎优质种苗,对满足南方丘陵山地珍贵用材造林对小叶栎种苗的迫切需求,意义重大。[方法]本研究以小叶栎成年母树枝条促萌新稍嫩叶为外植体,针对小叶栎叶片体细胞胚胎发生的过程,采用采用完全随机设计试验,研究不同影响因子在小叶栎愈伤组织诱导、增殖、胚性愈伤组织发生、胚状体分化与萌发进程中的影响及作用。[结果]结果表明:小叶栎叶片发育程度,影响小叶栎无菌材料的正常获得;以半革质化叶片为外植体,添加 1.0 mg·L-1 2,4-D + 1.0mg·L-1 6-BA,并添加 0.5g/L 水解酪蛋白的 MS 培养基,暗培养,获得叶片愈伤组织诱导率最高为34.17%;所获得的愈伤组织在不同浓度 NAA和 6-BA的MS培养基上增殖培养时,可获得良好的胚性愈伤组织发生和增殖;MS培养基含低浓度 0.1 mg·L-1 NAA + 0.1mg·L-1 6-BA的处理,获得了小叶栎胚状体的直接分化与间接分化形态建成;经培养基成分、激素与培养环境的调控,观察获得了从小叶栎叶片愈伤组织诱导、胚性愈伤组织发生,到球形胚、鱼雷胚、早期子叶胚和子叶胚后期等胚状体成熟分化阶段发育进程表现,并有少部分胚状体生根、抽叶萌发。[结论]本研究首次完整获得了小叶栎叶片体细胞胚胎发生过程,为小叶栎珍贵用材树种资源保存、成熟母树优良基因型的无性系化扩繁利用、苗木生产,奠定了关键技术支撑。