福建青冈体细胞胚胎发生研究

[目的]福建青冈(Quercus chungii F.P.Metcalf)属壳斗科(Fagaceae)青冈属(Cyclobalanopsis)常绿高大乔木,是我国亚热带地区优质硬木类珍贵用材造林树种,当前,福建青冈资源存量较少,种子因其特殊的"树发芽"特性,种子育苗成苗率低,福建青冈苗木短缺,因此,研究建立福建青冈体细胞胚胎发生无性快繁技术体系,生产福建青冈优质种苗,对满足珍贵用材造林对福建青冈种苗的迫切需求,意义重大。[方法]本研究以福建青冈两年生苗木新稍嫩叶为外植体,采用正交试验设计和单因素试验,研究不同影响因子在福建青冈叶片愈伤组织诱导、胚性愈伤组织发生、胚状体分化与萌发进程中的作用及影响。[结果]结果表明:使用 1%的抗坏血酸预处理接种叶片外植体,并将叶片呈"拱桥状"接种插入添加 3.0 g/L活性炭MS培养基中,减少外植体与培养基的接触面,能有效降低外植体褐化率至 5.5%以下;添加 1.0 mg·L-1 2,4-D + 1.0mg·L-1 6-BA,并添加 0.5g/L水解酪蛋白的MS培养基,暗培养,获得最高叶片愈伤组织诱导率为 52.2%;使用 1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-16-BA 植物生长调剂剂用于愈伤组织增殖培养,获得良好的胚性愈伤组织增殖培养,随后去除生长素使用降低的 6-BA至 0.5 mg·L-1 6-BA的MS培养基,促进了胚状体的分化和形态建成,逐步获得从福建青冈叶片愈伤组织诱导、胚性愈伤组织发生,到球形胚、鱼雷胚、早期子叶胚和子叶胚后期的胚状体成熟分化阶段发育,在无激素的 1/2 MS培养基上,胚状体生根萌发率达到 18%。[结论]本研究首次构建了福建青冈叶片体细胞胚胎发生体系,为福建青冈珍贵用材树种资源保存、优良材料的无性系化苗木扩繁利用,奠定了关键技术支撑。